牛骨骼肌分化相关DNA甲基化酶TET1与m6A甲基化酶METTL3的互作鉴定和应用

摘要

本发明提供了牛骨骼肌分化相关DNA去甲基化酶TET1的mRNA上m6A甲基化位点的鉴定方法，提供了鉴定TET1的m6A甲基化水平的引物序列和方法，根据m6A‑seq测序和m6A‑IP‑qPCR鉴定了TET1的m6A水平在成肌分化中的变化；通过m6A位点的同义突变改变TET1的m6A甲基化水平，证明了TET1的m6A甲基化具有影响骨骼肌分化的功能；提供了检测TET1受m6A甲基化修饰调控的方法，通过双荧光素酶报告系统和RIP实验证明TET1的表达受METTL3‑m6A‑YTHDF1的调控；提供了检测DNA甲基化影响m6A甲基化修饰的方法，证明了牛骨骼肌分化中DNA甲基化与RNA甲基化的互作。为m6A甲基化修饰调控肌肉生长发育的功能研究提供参考，鉴定了骨骼肌发育中的一种新的互作机制，为肉牛的定向选育提供了一种新的分子标记。