重组人可溶性CD40配体对树突状细胞体外分化、成熟及功能的影响

摘要

用Ficoll密度离心及贴壁法获得外周血单个核细胞 （PBMC ） ,PBMC经细胞因子组合诱导分化成树突状细胞 （DC ） :GM CSF （10 0ng/ml）与IL 4 （5 0ng/ml）诱导 5d后 ,分别加入TNF α （10ng/ml）或rhsCD4 0L （2 μg/ml）继续培养 4d ;倒置显微镜下观察DC形态 ,免疫荧光标记和流式细胞术分析DC表型 （CD1a、CD80、CD83、HLA DR、CD14、CD16、CD19）及摄取FITC Dextran抗原的能力 ;3 H TdR掺入法检测DC刺激自体混合淋巴细胞体外增殖反应 （MLR ）能力 ;ELISA法分析DC培养上清中IL 12的水平 ;Trans well细胞趋化实验检测DC对自体外周T淋巴细胞的趋化能力。发现经rhsCD4 0L刺激的DC表面分子 （CD1a、CD80、CD83、HLA DR ）的表达水平高于经典的细胞因子组合组 （GM CSF +IL 4 +TNF α ） ,同时rhsCD4 0L刺激后的DC摄取FITC Dextran的能力下降而刺激自体MLR和分泌IL 12的能力明显提高 ;而且rhsCD4 0L诱导的DC表面趋化因子受体CXCR4的表达水平及对自体外周T淋巴细胞的趋化能力均强于TNF α或FL激发的DC。rhsCD4 0L在体外不仅具有显著的诱导DC分化 ,促进DC成熟的功能 ,而且经rhsCD4 0L作用的DC能更有效地激发T淋巴细胞