非洲猪瘟病毒p72/p32蛋白的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的建立与比较

摘要

为了建立检测非洲猪瘟病毒（ASFV）的间接ELISA方法，试验基于p72/p32基因序列，构建了重组质粒pCold-p72/p32,将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，利用IPTG诱导获得相应的重组蛋白，通过SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式，利用Ni2+柱亲和层析法纯化p72/p32重组蛋白，并以此为包被抗原建立2种快速检测ASFV的间接ELISA方法，并对方法的临界值、有无交叉反应、重复性及敏感性进行了检测，并对来自不同猪场的临床样本进行验证性检测。结果表明：试验成功构建了重组质粒pCold-p72/p32,2种重组蛋白均能与ASFV阳性血清反应；p32以可溶性蛋白和包涵体蛋白形式表达，p72以包涵体蛋白形式表达。基于p32重组蛋白所建立的间接ELISA方法的临界值为0.543,基于p72重组蛋白所建立的间接ELISA方法的临界值为0.612;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%;与猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）等常见病原的阳性血清无交叉反应；与商品化的非洲猪瘟抗体试剂盒检测结果的符合率分别为95.1%和91.3%。说明试验建立的2种间接ELISA方法均具有良好的特异性、敏感性和重复性。通过比较，可以初步认为以p32重组蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测效果更好，可以用于猪血清样本中ASFV抗体的检测。