利用荧光免疫层析技术定量检测相思子毒素

摘要

目的利用荧光免疫层析技术,研发定量检测相思子毒素的试纸条。方法采用亲和层析法纯化相思子种子,用凝胶过滤层析纯化天然相思子毒素,制备鼠抗相思子毒素单克隆抗体和兔抗相思子毒素多克隆抗体,将特异性单抗结合荧光微球,兔多抗包被检测线,羊抗鼠二抗包被质控线,建立相思子毒素双抗体夹心定量检测方法及其试纸条,并对该试纸条进行性能评价。结果经纯化获得分子量31 k Da的相思子毒素A链和33 kDa的B链。研发的荧光免疫层析试纸条配合荧光免疫检测仪在0～50 ng/ml的检测范围内拟合曲线R~2=0.990,线性范围为1～10 ng/ml,最低检出限为1 ng/ml。批间、批內重复性均小于15%,常温稳定性14个月,采用动物血清和食物模拟样本检测特异性良好。结论开发的荧光免疫层析试纸条可以用于食品和环境中相思子毒素的检测。