寨卡病毒SYBR Green qPCR检测方法的建立

摘要

目的建立寨卡病毒的实时定量PCR（qPCR）检测方法。方法比较公布的寨卡病毒核酸序列,在保守区域NS5设计引物,用重组质粒建立标准曲线分析建立的qPCR方法的扩增效率和线性范围,用6个寨卡病毒分离株及登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒等其他黄病毒核酸进行灵敏性和特异性分析,并与3对已公布的寨卡病毒引物进行比较。结果针对寨卡病毒NS5基因设计了1对引物并建立了SYBR Green q PCR方法,以重组质粒为模板的扩增效率为89.3%,在2.0×10~1～2.0×10~8拷贝/μl范围内线性关系良好,最低可检测到100拷贝/反应。以ZIKV GD01株核酸为模板时,该方法可稳定检测到3.48×10-4ng/μl RNA,与两对已公布的引物敏感性相同,比另1对引物敏感性高10倍。5个模板浓度梯度各3次重复检测的变异系数为0.06%～0.62%。该方法可以检出6株非洲型和亚洲型寨卡病毒,且与其他4种黄病毒无交叉反应。结论建立了寨卡病毒SYBR Green qPCR检测方法。该方法灵敏性高、特异性强、重复性好,为口岸提供了技术手段和技术支撑。