肿瘤坏死因子α诱导蛋白3对NF-κB信号通路的抑制作用

摘要

研究肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(A20)在病毒诱导的NF-κB信号通路中的调控功能。用TNF-α刺激RAW264.7细胞,获得其细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增鼠A20基因,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切后插入pcDNA3.1-myc-His(-)。经鉴定,将真核表达质粒pcDNA3.1-A20转染293T细胞,用Western blot方法鉴定A20蛋白的表达。用荧光素酶报告基因的方法检测A20对NF-κB启动子的转录活性的影响。结果显示:成功构建了鼠源A20表达质粒,其在293T细胞后能够有效表达;A20能显著抑制TNF-α上调的NF-κB启动子活性,并呈剂量依赖效应;并能抑制柯萨奇病毒CVB3上调的NF-κB启动子活性,提示A20可调节病毒介导的炎症信号通路,为进一步研究A20参与抗病毒免疫调节机制奠定了基础。