HPV16 E2蛋白对巨噬细胞的影响

摘要

目的研究人乳头状瘤病毒16 (HPV16) E_2蛋白对巨噬细胞的影响。方法构建真核表达pEGFP-C1/DBD、pEGFP-C1/HPV16 E_2及pEGFP-C1/TAD载体,观察HeLa细胞、巨噬细胞内HPV16 E_2与DBD、TAD表达、定位,检测HeLa细胞培养上清液内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,应用流式细胞仪检测巨噬细胞凋亡率。结果GFP组、GFP-E_2组的细胞核、细胞质中均存在绿色荧光,GFP-DBD组仅细胞核中存在绿色荧光,GFP-TAD组仅细胞质中存在绿色荧光。巨噬细胞内融合蛋白的绿色荧光分布位置和HeLa细胞相同。GFP组、GFP-DBD组细胞培养上清液内TNF-α、IL-1β水平与空白对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05);GFP-E_2组、GFP-TAD组细胞培养上清液内TNF-β、IL-1β水平显著高于空白对照组和GFP组(均P0.05);GFP-E_2、GFP-TAD组巨噬细胞凋亡率高于空白对照组和GFP组(均P<0.05);GFP-TAD组巨噬细胞凋亡率高于GFP-E_2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HeLa细胞、巨噬细胞内均能检出HPV16 E_2与TAD、DBD、GFP融合蛋白的真核表达载体,其中GFP-TAD主要分布在细胞质内,GFP-DBD主要分布在细胞核内;同时,HPV16 E_2与TAD高表达能使巨噬细胞释放TNF-β、IL-1上调,进而对巨噬细胞凋亡进行有效诱导。