绵羊卵巢组织细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

摘要

试验旨在构建绵羊卵巢组织细胞的cDNA文库,为进一步研究绵羊卵巢中蛋白互作机制提供工具。本研究以不同发情周期的绵羊卵巢组织为材料,利用TRIzol试剂提取绵羊卵巢组织细胞总RNA,应用SMART技术经过长链PCR(LD-PCR)合成双链cDNA(ds cDNA),通过CHROMA SPIN^TM+TE-400柱纯化得到ds cDNA,并与线性pGADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞。用同源重组的方式,在酵母细胞内构建绵羊卵巢组织细胞酵母双杂交cDNA表达文库。结果构建了含有3×108个重组子的绵羊卵巢组织cDNA文库,插入片段长度多数为500~2000 bp,重组率达96%,重组子中平均插入的片段长度为1000 bp,文库滴度为2×107cfu/mL,符合建库标准。