RNR3调控的重组绿色荧光蛋白酵母细胞对化学诱变原的高通量筛选

摘要

目的用RNR3调控的全发光酵母细胞高通量筛选化学诱变原。方法以含有酵母嗜好遗传密码子的绿色荧光蛋白(yEGFP)报告载体为基本框架,用PCR方法从酵母(W303-1A)基因组扩增RNR3启动子,将其插入到yEGFP的上游,从而构建成RNR3调控的yEGFP酵母报告载体。用醋酸锂方法将载体转化于酵母细胞,构建成RNR3调控的yEGFP发光酵母细胞,可在96孔板中对不同浓度的化学诱变原进行筛选,具有快速、方便和高通量特点。结果对数种不同的DNA损伤药物研究结果表明,DNA烷化剂(甲磺酸甲脂)、DNA断裂剂(顺铂)、DNA结合剂(放线菌素D)和DNA合成酶抑制剂(5-氟尿嘧啶和羟基脲)可诱导RNR3的表达,而苯丁酸氮芥和4-硝基-N-氧化喹啉由于细胞的毒性的作用,未使RNR3发生表达。结论某些与致癌性有关的DNA损伤化学物能诱导RNR3表达,故该发光酵母细胞可用于对某些致癌物的高通量筛选。