普萘洛尔对血管瘤中HemSC凋亡和VEGF、bFGF表达的影响及临床意义

摘要

目的:研究普萘洛尔(PRN)治疗血管瘤患儿的药代动力学及其对血管瘤干细胞(HemSC)的作用机制。方法:12例患儿以1 mg/kg.d口服PRN,按每天1次(qd)和每天2次(bid,间隔8 h)随机分为2组,每组6例。用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)检测首次服药后2、6、10、24 h的血药浓度。对体外培养的HemSC分别给予0、0.02、0.2、2、20μmol/L浓度的PRN作用后,通过MTT、流式细胞仪分析、反转录PCR、实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验和免疫印迹分析,检测其对HemSC增殖、凋亡以及对VEGF、bFGF表达的影响。将HemSC经PRN处理后与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)联合注入BALB/c-nu裸鼠皮下,以未处理组作为对照,1周后处死取材,行HE染色,测定平均微血管密度(MVD),采用SPSS17.0软件包对数据进行配对t检验。使用免疫组织化学SP法观察PRN对血管瘤动物模型中VEGF、bFGF表达的影响。结果:口服PRN后,qd、bid 2组血药浓度均在2 h达到高峰,qd组的高峰浓度为(207.8±33.9)ng/mL,bid组的高峰浓度为(155.2±40.6)ng/mL,2组消除半衰期(t1/2)超过6 h。qd组在服药10 h时,血药浓度明显下降,而bid组在10 h时血药浓度升高。常规血药浓度的PRN不能抑制HemSC活性和增殖,对凋亡无显著影响,但能显著抑制HemSC表达VEGF、bFGF的mRNA和蛋白质,浓度在0.2～2μmol/L范围内抑制效果最佳。血管瘤动物模型显示,PRN能使MVD显著减少。免疫组化染色显示,VEGF、bFGF在IH组织中高表达;应用PRN后,VEGF表达减弱,而bFGF变化不明显。结论:PRN在常规剂量血药浓度内不能促进HemSC凋亡,但可抑制HemSC表达VEGF、bFGF。