不同煎煮时间银翘散含药血清对甲型流感病毒刺激巨噬细胞Toll样受体及其下游MyD88依赖和非依赖途径的影响

摘要

目的探讨银翘散抗甲型流感病毒的最佳煎煮时间。方法将银翘散药粉分别制备成浓度为0.25（低）、0.50（中）、1.00 g/ml（高）的溶液,加热到100℃时开始计时,分别煎煮至3、6、12 min,4℃保存备用。55只SD大鼠随机分为正常对照组、流感病毒组、3 min组（高、中、低浓度）、6 min组（高、中、低浓度）、12 min组（高、中、低浓度）。3、6、12 min组大鼠给予相应浓度的银翘散溶液灌胃,正常对照组及流感病毒组给予等量生理盐水,每天2次,每次2 ml,共5天,腹主动脉取血制备含药血清。用甲型流感病毒鼠肺适应株FM1刺激小鼠巨噬细胞株Ana-1,同时给予不同煎煮时间下的银翘散含药血清进行干预,培养24 h后吸取上清,检测Toll样受体3、4型（TLR3、TLR4）mRNA和蛋白表达,及其下游髓样分化因子（My D88）依赖和非依赖途径相关因子（My D88、TRAF-6、TRIF、TRAM）mRNA的表达。结果与正常对照组比较,流感病毒组TLR3、TLR4、My D88、TRAF-6、TRAM、TRIF mRNA的表达水平均明显升高（P〈0.05）;经不同煎煮时间、不同浓度银翘散干预后,各治疗组细胞的TLR3、TLR4、My D88、TRAF-6、TRAM和TRIF mRNA均明显下降（P〈0.05）,尤以3 min组中、高浓度下降最为明显,较12 min组同浓度差异有统计学意义（P〈0.05）。与流感病毒组比较,6 min组中浓度组对TLR3蛋白的表达有显著抑制作用（P〈0.05）,3 min组和6 min组各浓度均可降低TLR4蛋白含量（P〈0.05）。与12 min组同浓度比较,3 min组高浓度和6 min组中、高浓度对TLR4蛋白的表达有显著抑制作用（P〈0.05）。结论银翘散抗甲型流感病毒作用的最佳煎煮时间可能为煮沸后3~6 min。