小分子干扰RNA抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株中生存素的实验研究

摘要

探讨小干扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生存素基因表达的抑制作用及对细胞凋亡、增殖和细胞周期的影响。将已构建的靶向生存素的siRNA表达质粒采用脂质体法转染A431细胞株。应用RT-PCR检测A431细胞生存素mRNA的表达,Western blot检测生存素蛋白的表达,流式细胞术检测Annexin标记的凋亡细胞和分析细胞周期,噻唑蓝(MTT)法分析细胞增殖。结果显示,与未处理的A431细胞株和转染空载体的A431细胞株比较,转染siRNA表达质粒可以明显抑制生存素基因在转录和翻译上的表达;siRNA表达质粒组的凋亡率明显增加达到21.3%;24、48、72和96h的细胞增殖抑制率也明显增加,并随着时间抑制效率变高;细胞周期分析发现抑制生存素表达使得A431细胞株出现明显的G2/M期阻滞现象。因此,靶向生存素的siRNA表达质粒可以特异性抑制生存素的表达,显著抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。靶向生存素的siRNA表达质粒为鳞状细胞癌的基因治疗提供了一种新思路。