从噬菌体展示十二肽库中筛选钠泵α_1亚基M1-M2膜外区特异性结合肽

摘要

目的获得人钠泵α1亚基M1-M2膜外区的特异性结合肽,以阻断或拮抗哇巴因对钠泵的抑制作用,为高血压的治疗提供理论和实验依据。方法以人工合成的钠泵α1亚基M1-M2膜外区多肽(ATEEEPQNDN-LGGGS)为靶分子,从噬菌体随机12肽库淘选能与之特异性结合的多肽,通过双夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和浓度依赖性实验鉴定噬菌体阳性克隆,提取DNA测序,推导其氨基酸序列,并检测其对哇巴因的竞争性拮抗作用。结果从噬菌体12肽库中筛选出4个阳性噬菌体克隆,测序后其氨基酸序列完全一致,均为:WHWRNPDF-WYLK。哇巴因竞争性抑制试验显示,获得的噬菌体展示肽可以与哇巴因竞争钠泵α1亚基M1-M2膜外区结合表位,阻止哇巴因与钠泵结合。结论获得了人钠泵α1亚基M1-M2膜外区的特异性结合肽,它能竞争性抑制哇巴因与钠泵的结合,为进一步探讨钠泵的作用机制及高血压的治疗奠定了基础。