小鼠分泌型TIGIT慢病毒载体的构建及其功能研究

摘要

本文旨在构建表达小鼠TIGIT胞外段与人IgG-Fc段融合基因TIG-Fc的慢病毒载体,验证TIG-Fc蛋白的功能,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础。具体方法是将TIG-Fc融合基因克隆到pLOX载体质粒上,鉴定正确连接的克隆TIG-Fc-pLOX,并与pCMV△R8.2和pMD.G三质粒共转染人胚肾(HEK)293T细胞,收获上清中携带T1G-Fc基因的慢病毒Lenti-TIG-Fc。感染了Lenti-TIG-Fc的293T细胞与内毒素刺激成熟的小鼠树突状细胞(DC)共孵育后,ELISA检测上清中IL-10水平。结果显示成功构建的慢病毒Lenti-TIG-Fc感染293T细胞后,可使其稳定分泌TIG-Fc融合蛋白。融合蛋白可诱导成熟DC分泌IL-10明显增加。