NLRP3炎性小体在Th17过度分化的皮肌炎中的作用机制

摘要

目的探讨NLRP3炎性小体在皮肌炎中对免疫应答的作用及意义。方法以96孔板培养大鼠骨骼肌细胞C2C12,设立两组,每组重复3次。对照组采用完全弗氏佐剂诱导皮肌炎细胞模型DM-C2C12,实验组构建皮肌炎细胞模型后通过质粒转染构建NLRP3过表达的皮肌炎细胞模型DM-C2C12/NLRP3^+。qPCR和Western blot分析炎性小体相关基因(ASC、NLRP3、Caspase-1)的表达情况,ELISA检测细胞上清IL-18和IL-1β的分泌。使用实验组和对照组细胞培养基上清刺激小鼠的原代淋巴细胞,流式细胞术检测处理后小鼠原代淋巴细胞中Th17/Treg细胞分化情况,ELISA检测处理后淋巴细胞IL-10、IL-17和TGF-β的分泌。结果与对照组相比,实验组细胞中ASC、Caspase-1和NLRP3表达水平显著上调(P<0.05),细胞培养基中IL-18和IL-1β含量显著上调(P<0.05);实验组细胞上清处理可以显著上调小鼠原代淋巴细胞中Th17细胞含量(P<0.05),下调Treg细胞含量(P<0.05),导致Th17/Treg比例显著提高(P<0.05),IL-10和TGF-β表达下调以及IL-17表达提高(P<0.05)。结论NLRP3炎性小体通过下游因子的表达和分泌,可能导致Th17/Treg细胞比例失衡,调控皮肌炎的发生和发展。