正交试验设计筛选scFv包涵体变性和复性工艺

摘要

单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)包涵体的变性和复性受p H值、温度、盐浓度、氧化还原电对、添加剂等多种因素影响,快速找到合适的变、复性条件是蛋白质纯化的重点和难点。本试验以scFv-Z2为研究对象,通过正交试验设计筛选scFv-Z2包涵体的变性和复性条件,找出关键的影响因素,得到最适变性条件:6 mol/L盐酸胍变性,变性时间24 h;最适复性条件:以4 mol/L尿素、1 mol/L精氨酸(Arg)、1 mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)和0.02 mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSGG)的溶液为复性液,样品与复性液比例为1∶30,复性时间7 d。通过SP阳离子柱分离后得到高纯度(99.2%)scFv-Z2单体,经工艺放大重复验证,最终开发出稳定可靠的纯化工艺路线。本研究建立了正交试验设计在scFv-Z2包涵体纯化工艺开发中的新应用。