基因拼接型蜡状芽孢杆菌ZY12磷脂酶D的异源表达及转酯活性的研究

摘要

磷脂酶D是一类酯键水解酶,能够水解磷脂生成磷脂酸,并在某些羟基化合物存在的条件下,通过脱水缩合生成新型磷脂。利用磷脂酶D生成新型磷脂的活性,通过生物转化可以制备稀有磷脂如磷酯酰丝氨酸等。因此,磷脂酶D在食品及医疗领域应用潜力巨大。实验室前期发现的蜡状芽孢杆菌ZY12来源新型磷脂酶D具有水解活性,但检测不到转酯活性,将其与链霉菌PMF来源磷脂酶D进行基因拼接,通过pET-30b重组质粒在大肠杆菌BL21(Lyss)中异源表达。实验结果表明,通过基因拼接手段对蜡状芽孢杆菌ZY12磷脂酶D的改造,使该磷脂酶D获得转酯活性。在诱导温度为16 ℃、IPTG添加量0.5 mmol/L、诱导时间12 h,可溶性拼接型磷脂酶D活性最高87 mU/mL。转酯反应温度为45 ℃、pH为4.5、反应时间3 h,生成磷酯酰丝氨酸产量最高7.1 mg/L。