茎-环RT-qPCR法定量检测羊背最长肌3种miRNA的表达

摘要

本研究建立了一种可避免基因组污染的茎—环RT-q PCR miRNA定量检测方法。利用该方法可准确、快速、低成本地检测湖羊和杜泊羊×湖羊杂交羊肌肉中miR-1、miR-133和oar-miR-299-5p的表达。以6月龄雄性湖羊和杜泊羊×湖羊杂交羊F1代各4只的背最长肌样品为研究对象,利用特异性茎环反转录引物以及miRNA上下游引物对3种miRNA进行基于SYBR GreenⅠ的荧光定量PCR检测,并以5S rRNA为内参基因,2-ΔΔCt法检测miRNA的相对表达量。结果显示:6月龄雄性湖羊背最长肌中oar-miR-299-5p表达量极显著高于6月龄雄性杜泊羊×湖羊杂交羊(P<0.01),提示oar-miR-299-5p可能与湖羊早期背最长肌的生长发育相关。