茎环法RT-qPCR定量检测细胞抗猪瘟病毒siRNA的

摘要

RNAi(RNA interfererice)已成为特异抗病毒治疗研究的热点，但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siNl和siN2)在细胞中的表达水平，设计并以交叉组合方法筛选了具有较高特异性和灵敏度的siRNA特异茎环引物(SLP-N1-6和SLP-N2-8)，成功地建立了最优的siNl和siN2的茎环法RT．qPCR检测方法。该方法表现出良好的特异性和较高的灵敏度，能检测出10。至10。个拷贝的siRNA，至少可达7个数量级的检测范围，平行性好(Rsp=0．999)，扩增效率高(Eff．=98．2％)。茎环法RT-qPCR能准确地定量检测抗CSFV的PK-15细胞克隆的siNl／siN2表达水平，可结合常规的检测病毒水平的间接免疫荧光和TCID50等技术定量评价RNAi抗CSFV的有效性，为未来抗猪瘟转基因猪的抗病毒效果评价提供了先进的检测技术。