KingFisher Flex核酸纯化系统上树木叶片DNA的提取方法

摘要

以桉树4种/杂种的叶片为材料,比较了5种磁珠试剂盒在King Fisher Flex核酸纯化系统上自动提取的DNA得率和纯度,初步选出了2种较好的试剂盒。比较了King Fisher Flex上不同的洗涤速度,最优为Medium。初选的2种试剂盒所提的DNA均可有效用于PCR扩增,表明DNA纯度均较好,确定得率最高的为最优试剂盒。对比手动的改良CTAB法(DNA得率19.0μg/g,OD_(260)/OD_(280)为1.97,OD_(260)/OD_(230)为2.03),本研究优化的方法可显著提高DNA得率(103.6μg/g)且DNA纯度相似(OD_(260)/OD_(280)为1.93,OD_(260)/OD_(230)为1.89)。优化的方法可有效用于马占相思、银中杨、降香黄檀、思茅松、马尾松和短枝木麻黄叶片的DNA提取。这对树木分子生物学研究的高通量DNA提取有重要的应用价值,对非木本植物的DNA提取和其他基于磁珠法的纯化系统亦可提供有益的方法参考。