有效EDRF启动子驱动GFP基因表达的研究

摘要

目的通过克隆不同长度红系分化相关因子(EDRF)基因启动子,驱动GFP基因的表达,探讨EDRF启动子的特点。方法利用PCR扩增5种不同长度的EDRF启动子(长度分别为697、496、484、372、283bp),并将启动子分别克隆至pcDNA-GFP载体上,构建驱动GFP表达载体后,转染N IH3T3和M EL细胞,采用荧光显微镜、流式细胞术比较不同长度启动子的活性。结果经荧光检测,在N IH3T3和M EL细胞中,372bp长的启动子(EDRF基因的-116^+256bp区)驱动GFP荧光强度最亮、阳性细胞最多。FACS分析发现,在M EL细胞中,372bp启动子组GFP细胞的阳性率明显高于其他长度启动子组(P<0.01);在N IH3T3细胞中,372bp启动子组GFP细胞的阳性率为(31.0±0.7)%,高于其他长度启动子组(P<0.01),但其他长度启动子组GFP阳性率均高于20%,说明在N IH3T3细胞中EDRF启动子驱动GFP表达的特异性差,而在M EL细胞(红细胞系)中该启动子驱动GFP表达的特异性较强。结论EDRF启动子(-116^+256)bp区为最有效的驱动基因表达区域,可以用于驱动基因表达的后续研究。