顶空-气相色谱法测定流感病毒裂解疫苗中游离甲醛的残留量

摘要

目的建立流感病毒裂解疫苗中游离甲醛残留量的顶空-气相色谱测定法,并进行优化及验证。方法对顶空-气相色谱法中的顶空平衡温度(70、80、90、100、110、120℃)、顶空平衡时间(30、40、50 min)、色谱柱[HP-5(30 m×0.320 mm,0.25μm)、HP-FFAP(25 m×0.320 mm,0.50μm)、DB-1301(30 m×0.320 mm,0.25μm)、DB-23(30 m×0.320 mm,0.25μm)及DB-WAX(30 m×0.250 mm,0.25μm)]、分流比(10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1)、不同进样模式(分流模式和脉冲分流模式)进行优化,同时验证方法的系统适用性、检测限、定量限、线性范围、重复性及准确性。采用优化方法检测0.001μg/mL甲醛标准溶液及流感病毒裂解疫苗样品。结果最适检测条件为:顶空平衡温度为100℃,顶空平衡时间为30 min,采用DB-1301(30 m×0.320 mm,0.25μm)色谱柱分离,分流模式,分流比为20∶1。5次检测的理论板数不低于5000,甲醛色谱峰与其相邻色谱峰的分离度均>1.5;检测限及定量限分别为0.0003和0.001μg/mL;甲醛在0.001~0.04μg/mL浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系,获得线性回归方程为y=561.89346 x-0.0444142,r为0.99971;各批流感病毒裂解疫苗连续进样6次检测结果的RSD均<10.0%;加标量0.0025及0.005μg的检测回收率为78.6%~98.6%。0.001μg/mL甲醛标准溶液及流感病毒裂解疫苗的检测结果分别为0.00129730和0.00348097μg/mL。结论建立的方法具有较高的灵敏性、准确性、重复性,有望应用于流感病毒裂解疫苗中游离甲醛残留量的测定。