特异性细胞毒性T淋巴细胞体外培养体系的建立与鉴定及对卵巢癌细胞的影响

摘要

目的探讨特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外培养体系的建立与鉴定及对卵巢癌细胞的影响,为开发一种高效、安全的抑制杀伤卵巢癌细胞的免疫疗法提供依据。方法提取人外周血单个核细胞(PBMC),加入Cp G模体的寡脱氧核苷酸序列(Cp GODN),人参皂苷Rg1药物浓度分别为3.75μg/ml、7.5μg/ml、15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml与不加药物的对照组比较,采用单一变量控制法,验证Cp GODN,人参皂苷Rg1和人类表皮生长因子受体α(HER2/neu)抗原肽的最佳比例。用流式细胞仪检测Cp GODN,人参皂苷Rg1和HER2/neu混合物刺激的PBMC表面标记物CD3、CD4和CD8,并检测细胞核型。用人参皂苷Rg1和HER2/neu混合物刺激的PBMC形成的CTL作用到SKOV-3细胞中,培养一段时间观察CTL的抑制作用。结果随着Cp GODN/人参皂苷Rg1药物浓度的增加,CTL作用显著增强,差异有统计学意义(P<0.05),当药物浓度达到30μg/ml时,抑制效果进入平台,药物浓度再增加,抑制效果不变。因此,以Cp GODN和人参皂苷Rg1有效浓度30μg/ml与HER2/neu抗原肽片段10μg/ml混合,加入到提取的PBMC中,培养34 d,建立CSR-CTL体系。流式细胞仪检测,随着培养时间增加CD3、CD4和CD8阳性细胞数量显著增多,差异有统计学意义(P<0.05)。CSR-CTL对卵巢癌细胞SKOV-3生长有显著的抑制作用,观察组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用Cp GODN,人参皂苷Rg1和HER2/neu抗原肽混合物刺激PBMC可建立安全、特异性高的细胞毒性T淋巴细胞体外培养体系CSR-CTL,并且CTL可抑制人卵巢癌SKOV-3的生长。