节瓜ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

摘要

为了探索适用于节瓜ISSR-PCR反应的反应体系以及得到适用于该体系的ISSR引物,首先利用正交实验的方法对节瓜ISSR-PCR反应体系的三因素(模板,2×san Taq PCR mix预混液,引物)的工作浓度进行优化。然后依据Tm值的差异将引物分成了三组,每组分别设定不同的退火温度,以节瓜基因组DNA为模板进行PCR扩增,经2%琼脂糖凝胶电泳和UVP成像,结果表明,第二组引物扩增条带的数目、清晰度明显优于第一组和第三组的引物扩增的条带,第二组45℃退火条件下的扩增情况明显优于在40℃退火条件下的扩增。因此,通过实验与分析,确定了节瓜ISSR-PCR反应体系是DNA模板(50 ng/μL)2μL、2×san Taq PCR mix预混液10μL、引物(10μmol/L)1μL,筛选到了18条适合在节瓜的ISSR-PCR反应中应用的引物,其最适合的退火温度是45℃。