广西产拳卷地钱SCoT-PCR引物筛选及反应体系优化

摘要

目的：对影响广西产拳卷地钱SCoT-PCR反应的各因素进行优化,建立稳定的反应体系.方法：采用改进的CTAB法提取拳卷地钱基因组DNA;以DNA浓度、Taq聚合酶、Mg2+、dNTP、引物浓度的5个主要因素进行5因素4水平的正交设计,对拳卷地钱SCoT-PCR反应体系进行优化.结果：DNA条带整齐,无RNA污染、无降解、无弥散的荧光出现、加样孔清晰.紫外检测结果,OD260/280在1.7～2.0之间,拳卷地钱最佳反应体系(50μl)为:DNA模板30ng,MG2+2mmol/L,dNTP0.2mmol/L,引物0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5U.结论：建立并优化了拳卷地钱SCoT-PCR反应体系,为拳卷地钱品种鉴定、遗传多样性评价及亲缘关系分析提供实验数据,为药材资源开发利用提供参考依据.