三丙二酸富勒烯对DNA限制性内切酶和Taq DNA聚合酶活性的抑制作用

摘要

采用具有HindⅢ和EcoRⅠ单一酶切位点的pEGFP-N1超螺旋型质粒为底物,检测三丙二酸富勒烯(trimalonic acid C60,TMA C60)对DNA限制性酶切反应的作用.同时以该质粒为模板,测定TMA C60对Taq DNA聚合酶催化的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的影响.酶切产物与PCR扩增产物均通过琼脂糖凝胶电泳来显示.实验发现,在质粒酶切体系或PCR体系中添加TMA C60后,酶切或扩增产物的生成量均显著减少.TMA C60的作用存在浓度依赖性,对HindⅢ,EcoRⅠ两种酶切反应和PCR的半抑制浓度IC50值分别为16.3,6.0,6.0μmol/L.两种活性氧清除剂L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁和叠氮化钠在浓度为2～10mmol/L时,不能拮抗TMA C60对PCR和两种酶切反应的抑制作用.但是,在PCR体系中增加Taq DNA聚合酶能够拮抗TMA C60的作用.这些结果表明,TMA C60能够抑制上述3种DNA代谢相关酶的活性,其作用可能与活性氧无关.