采用活体成像技术快速评价DNA疫苗载体在小鼠体内的表达

摘要

目的采用活体成像技术快速评价DNA疫苗载体在小鼠体内的表达,为DNA疫苗载体的应用和改造提供参考。方法分别构建含有萤火虫荧光素酶基因(luciferase)及HIV-1CN54Gag基因DNA,且携带不同转录调控元件(posttranscriptional regulatory element)HPRE/WPRE的疫苗载体(p DRVI1.0Luc、p DRVI1.0HLuc、p DRVI1.0WLuc、p DRVI1.0Gag、p DRVI1.0HGag和p DRVI1.0WGag),均经后肢胫骨前肌注射BALB/c小鼠,20μg/只。p DRVI-1.0Luc、p DRVI1.0HLuc和p DRVI1.0WLuc组仅免疫1次,于免疫后第1、7、14天采用活体成像技术检测小鼠体内荧光表达强度;p DRVI1.0Gag、p DRVI1.0HGag和p DRVI1.0WGag组分别于第0、2、4周进行免疫,于末次免疫后第2周进行体液(ELISA法)及细胞免疫检测(ELISPOT法)。结果 p DRVI1.0Luc、p DRVI1.0HLuc、p DRVI1.0WLuc组小鼠于免疫后第1及7天,体内荧光均局限分布于注射部位,未出现扩散转移的现象,且p DRVI1.0HLuc质粒发光强度最强(P<0.05),免疫第14天各组均未检测到明显的荧光素酶表达;p DRVI1.0HGag组小鼠血清中抗Gag蛋白特异性抗体水平和Gag蛋白特异的分泌IFNγ的脾淋巴细胞数均明显高于p DRVI1.0Gag和p DRVI1.0WGag组(P<0.05)。结论活体成像技术可用于快速评价DNA疫苗载体在小鼠体内的表达,为DNA疫苗载体改造及免疫策略的优化提供了一个良好的研究平台。