半原位灌流法分离成年鸡肝细胞及原代培养

摘要

采用半原位灌流法,对40 - 50日龄的海蓝公鸡进行肝细胞分离,采用台盼蓝拒染法测定细胞总数并计算肝细胞实时存活率,肝细胞以5×105 mL的密度接种于6孔细胞培养板,每孔3 mL.在CO2培养箱中培养,观察细胞形态,测定不同培养阶段细胞培养上清液中LDH活力.结果显示每只鸡肝脏分离获得的细胞产量为（4.1±0.2） ×10^8个,肝细胞实时存活率为（95±1）％,培养48 h至144h,细胞上清液中LDH活力在低水平下保持稳定,细胞可维持良好的生长状态达7d以上.显示该方法可用于分离培养成年鸡肝细胞,分离培养的鸡肝脏细胞可用于研究细胞代谢、基因表达和肝细胞毒性.