腺苷酸激酶4慢病毒过表达质粒的构建及鉴定

摘要

目的构建腺苷酸激酶4(adenylate kinase 4,AK4)慢病毒过表达质粒,并进行鉴定。方法从Hep G2细胞中扩增AK4基因,将其克隆至载体LV5,构建重组质粒LV5-AK4,经测序鉴定后,将鉴定正确的LV5-AK4和包装质粒p Gag/Pol、p Rev、p VSV-G共转染HEK293T细胞,包装慢病毒;将慢病毒原液进行10倍系列稀释(10^(-1)~10^(-4)),感染HEK293T细胞,检测病毒滴度;慢病毒感染Hep G2细胞,Western blot法检测AK4蛋白的表达水平。结果重组质粒LV5-AK4经测序鉴定证明构建正确,并成功包装成慢病毒,病毒滴度为5×10~8 TU/ml。试验组Hep G2细胞中AK4蛋白的表达水平显著高于空白对照组及阴性对照组(P<0.01)。结论成功构建了携带AK4基因的重组慢病毒过表达质粒,为进一步研究低氧应激细胞中AK4的功能及其分子作用机制奠定了基础。