酵母胱硫醚β-合成酶的表达及酶活鉴定

摘要

将重组质粒pET45b-yCBS转入E.coli BL21中,构建高效表达酵母胱硫醚β-合成酶(yeast cystathionineβ-synthase,1)的重组菌。研究诱导时菌体浓度、诱导剂IPTG浓度、诱导时间和温度,以及在培养基中添加不同浓度的山梨醇、葡萄糖、甘油对1表达量的影响。使用Ni2+亲和色谱柱纯化重组蛋白,再经His-Trap脱盐柱脱盐,以茚三酮法检测蛋白活性。结果表明,培养基中添加0.05%的山梨醇,重组菌在37℃培养3 h后,添加终浓度为0.1 mmo/L的IPTG于20℃诱导培养15 h,可溶性1表达量达到110 mg/L;纯化后比活为1 320 u/mg。