青娥方含药血清对破骨细胞前体RAW 264.7细胞FAK/Src/p130Cas通路及上清液炎症因子的影响

摘要

目的观察青娥方含药血清对破骨细胞前体RAW 264.7细胞FAK/Src/p130Cas通路相关基因蛋白表达及上清液炎症因子的影响。方法制备青娥方含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的破骨细胞前体RAW 264.7细胞。干预12 h和24 h后,提取mRNA和蛋白,荧光定量PCR(q PCR)检测FAK/Src/p130Cas及下游信号关键因子CRK、C3G和RAS mRNA表达的变化,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测FAK/Src/p130Cas及下游信号关键因子CRK、C3G和RAS蛋白表达的变化;应用ELISA法检测细胞上清液IL-6、TNF-α、PGE2含量。结果与同期生理盐水血清组比较,青娥方含药血清组FAK、Src、p130Cas、CRK、C3G和RAS的RNA和蛋白表达均明显减少(P<0.05,P<0.01),以FAK、Src、p130Cas下降最为显著,而细胞上清液炎症因子IL-6,TNF-α和PGE2含量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论青娥方含药血清能够下调FAK/Src/p130Cas及其下游信号分子的表达,抑制RAW 264.7细胞分泌炎症因子,从而抑制RANKL+MCSF诱导的破骨细胞分化。