ACAC通过未折叠蛋白反应导致奶牛乳腺上皮细胞凋亡

摘要

为了探讨乙酰乙酸(acetoacetic acid,ACAC)能否通过激活奶牛乳腺上皮细胞的未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)导致奶牛乳腺上皮细胞凋亡,试验用0,0.6,1.2,2.4 mmol/L的ACAC诱导MAC-T 24 h;或用500μg/mL牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)预处理MAC-T 12 h后再加入1.2 mmol/L ACAC处理24 h。使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测细胞凋亡率;通过实时荧光PCR方法检测凋亡相关基因[B淋巴瘤-2蛋白(B-cell lymphoma 2,Bcl2)、Bcl2相关蛋白X(Bcl2 associated X,Bax)、半胱氨酸蛋白酶9(cysteine protease 9,Caspase9)和半胱氨酸蛋白酶3(cysteine protease 3,Caspase3)]与UPR相关基因[葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78 ku,GRP78)、激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)和X盒结合蛋白1s(X-box binding protein 1s,XBP1s]的相对表达量。结果表明:用0.6,1.2,2.4 mmol/L的ACAC处理MAC-T后,细胞凋亡率呈剂量依赖性升高;凋亡相关基因Bcl2表达下调,Bax、Caspase9、Caspase3表达上调;UPR的下游基因GRP78、ATF4和XBP1s表达上调。用TUDCA预处理后,缓解了ACAC导致的MAC-T凋亡相关基因和UPR下游基因表达的变化及细胞凋亡率升高。说明高浓度的ACAC通过UPR导致奶牛乳腺上皮细胞凋亡。