心外膜脂肪组织源瘦素促进高脂喂食诱导的肥胖大鼠心肌成纤维细胞增殖

摘要

目的探讨心外膜脂肪组织来源的瘦素对心肌成纤维细胞(CF)增殖的作用及其可能机制。方法 8周龄雄性Wistar大鼠20只随机分为2组,分别给予高脂饲料及标准大鼠饲料喂养,12周后筛选出7只肥胖大鼠作为肥胖组,普食组随机选取7只作为对照组,每周称重。喂养12周后颈动脉插管测得血压;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清瘦素水平;取大鼠心肌组织行HE及Masson染色,比较两组心脏结构改变;Western blot法检测两组大鼠心外膜脂肪组织瘦素和瘦素受体蛋白表达水平。利用大鼠心外膜脂肪组织制备条件培养基,ELISA法检测条件培养基中瘦素水平;分别利用条件培养基、瘦素、瘦素拮抗剂(leptin-tA)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂、p38抑制剂等干预大鼠CF,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖情况,Western blot法检测细胞瘦素、p-ERK、t-ERK、p-p38、t-p38蛋白表达。结果与对照组相比,肥胖组大鼠血清瘦素水平升高,心肌结构紊乱,胶原沉积增加。大鼠心外膜脂肪组织瘦素及瘦素受体蛋白表达增高(均P<0.05)。体外实验发现,条件培养基(心外膜脂肪组织制成的上清液)瘦素水平明显升高[(8.03±0.75)比(4.17±0.36)μg/L,P<0.05],且高于血清瘦素水平[(8.03±0.75)比(5.39±0.26)μg/L,P<0.05];与对照组大鼠心外膜脂肪组织制备的条件培养基培养的CF相比,利用肥胖组大鼠心外膜脂肪组织制备的条件培养基培养的CF增殖显著增加,ERK1/2、p38磷酸化水平升高(均P<0.05);加入瘦素拮抗剂后,细胞ERK1/2、p38磷酸化水平降低(均P<0.05),加入瘦素拮抗剂、ERK1/2抑制剂、p38抑制剂后细胞增殖降低。结论心外膜脂肪组织来源的瘦素可以促进肥胖大鼠CF增殖,这种作用可能与ERK1/2和p38信号通路激活有关。