二氢杨梅素促进白色脂肪组织棕色化抵抗高脂饮食诱导的肥胖

摘要

目的：本实验观察DHM是否促进WAT棕色化抵抗高脂饮食诱导的肥胖，其作用机制是否是通过AMPK-Sirt1-PGC1α信号通路来发挥的，该研究为肥胖的治疗提供了新的思路和方向。 方法：将c57bl/6j小鼠随机分成6组：1.正常对照组（normal diet,ND组）：正常小鼠采用普通饲料喂养，同时用双蒸水（1次/天，灌胃）处理16周；2.正常对照+低剂量二氢杨梅素组（ND+L-DHM组）：正常小鼠采用普通饲料喂养，同时用125mg/kg/d的二氢杨梅素（1次/天，灌胃）处理16周；3.正常对照+高剂量二氢杨梅素组（ND+H-DHM组)：正常小鼠采用普通饲料喂养，同时用250mg/kg/d的二氢杨梅素（1次/天，灌胃）处理16周；4.高脂饮食组(high fat diet,HFD组)：正常小鼠采用高脂饲料喂养，同时用双蒸水（1次/天，灌胃）处理16周；5.高脂饮食+低剂量二氢杨梅素组（HFD+L-DHM组）：正常小鼠采用高脂饲料喂养，同时用125mg/kg/d的二氢杨梅素（1次/天，灌胃）处理16周；6.高脂饮食+高剂量二氢杨梅素组（HFD+H-DHM组）：正常小鼠用高脂饲料喂养，并且用250mg/kg/d的二氢杨梅素（1次/天，灌胃）处理16周。每两周测一次体重和空腹血糖，16周后，从小鼠眼眶静脉取血测量血脂，处死动物后，测量体重和体长（从小鼠鼻尖到肛门的距离），算出Lee's指数（Lee's指数=(体重*1000)^(1/3)/体长(cm)）。取肩胛下、腹股沟和附睾处脂肪组织称重，随后，将这些脂肪组织一部分甲醛固定，苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色来观察脂肪细胞大小，免疫组化检测棕色化基因UCP1的表达；另一部分通过实时定量聚合酶链式反应（Quantitative Real-timePolymerase Chain Reaction,RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹法（Western Blot,WB）检测各组小鼠脂肪组织中WAT棕色化因子（UCP1，Prdm16）和AMPK-Sirt1-PGC1α信号通路相关蛋白的表达。 结果：高脂饮食喂养小鼠16W后，HFD组小鼠体重高于ND组体重20%，提示肥胖小鼠模型复制成功。从第8W开始，HFD组体重和血糖明显高于ND组，HFD组体脂重量、Lee’s指数/血糖和血脂明显高于ND组，L-DHM和H-DHM能显著降低高脂饮食喂养的肥胖小鼠体重、体脂重量，Lee’s指数、血糖和血脂；但DHM对正常小鼠上述指标无显著影响。HE染色所示：与ND组相比，HFD组小鼠肩胛下、腹股沟和附睾处的脂肪细胞大小明显增大，HFD+L-DHM和HFD+H-DHM组的小鼠脂肪细胞明显小于HFD组,但DHM对正常小鼠脂肪细胞并无明显影响。免疫组化结果显示：HFD组小鼠肩胛下，腹股沟和附睾处脂肪组织的棕色化因子UCP1的表达明显低于ND组，HFD+L-DHM和HFD+H-DHM组脂肪组织中UCP1的表达明显高于HFD组。PCR和Western Blot检测结果显示：与ND组相比，HFD组中的UCP1，Prdm16，AMPK，PGC1α，Sirt1的基因和UCP1，Prdm16，AMPK，PGC1α，Sirt1的蛋白表达明显降低，L-DHM和H-DHM可以显著提高肥胖小鼠的UCP1，Prdm16，AMPK，PGC1α，Sirt1的基因和UCP1，Prdm16，AMPK，PGC1α，Sirt1的蛋白的表达,但是DHM对正常小鼠上述指标无影响。 结论：杨梅素促进白色脂肪棕色化抵抗高脂饮食诱导的肥胖；二氢杨梅素可能经AMPK-Sirt1-PGC1α信号通路促进WAT棕色化。

目录

声明

缩略词

第一章 绪论

1) 白色脂肪棕色化：肥胖及其相关代谢性疾病防治的新策略。

2) 二氢杨梅素是否促进WAT棕色化抵抗肥胖的发生？

第二章 材料与方法

2.1 试剂和仪器

2.1.1 主要仪器

2.1.2 主要试剂

2.1.3 实验动物

2.2 药品与试剂

2.2.1 磷酸盐缓冲液的配制:

2.2.2 二氢杨梅素溶液的配制

2.2.3 1×Tris-buffer电泳缓冲液的配制：

2.2.4 10%的过硫酸胺溶液的配制：

2.2.5 转膜液（湿转）的配制：

2.2.6 TBST溶液的配制：

2.2.7 5%脱脂牛奶的配制：

2.2.8 高脂饲料配制

2.3 实验方法

2.3.1 肥胖小鼠模型的建立

2.3.2 实验动物分组

2.3.3 空腹血糖、Lee's指数、体脂重量和血脂的测量

2.3.4苏木素-伊红染色（HE染色）

2.3.5免疫组化

2.3.6 实时定量荧光聚合酶链式反应（RT-qPCR）

2.3.7 蛋白免疫印迹法（WB）

2.4 统计分析与作图

第三章 结果

3.1二氢杨梅素对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的影响

3.1.1二氢杨梅素降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重

3.1.2二氢杨梅素降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠体脂重量、血糖、Lee's指数

3.1.3二氢杨梅素降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠血脂

3.2二氢杨梅素促进肥胖小鼠WAT棕色化

3.2.1.DHM减小肥胖小鼠脂肪组织细胞大小

3.2.2 DHM增加肥胖小鼠脂肪组织棕色化功能蛋白UCP1的表达

3.3 二氢杨梅素促进肥胖小鼠WAT的机制

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

文献综述:非编码RNA在棕色/米色脂肪细胞发育中的调控网络

攻读硕士期间的发表的论文

致谢