志贺菌耐多药外排泵emrE基因作用分析

摘要

目的对临床耐多药志贺菌株H24的1种小多重耐药性家族(SMR)外排泵emrE基因进行定向分子进化,研究基因突变增强emrE外排泵耐药性的潜力,调查志贺菌外排泵基因emrE基因垂直进化对临床耐药发展的影响。方法通过用体外易错PCR(EP-PCR)方法对emrE基因进行随机突变实验,用微量稀释生长曲线法进行菌株的耐药性筛选,用荧光实时定量RT-PCR测定基因表达情况,应用DNA分析软件DNAStar进行生物信息学分析。结果在31个突变子中筛选到了突变子ep2-emrE(DH5α),它的emrE基因有6个氨基酸突变,分别为Thr-28→Ala,Cys-39→Ser,Tyr-40→终止子,Ser-72→Arg,Leu-93→Phe,Ile-101→Phe。它不但增强四环素和红霉素的耐药能力,还产生新的氯霉素耐药能力。结论尽管emrE基因较易获得新增耐药性,但在志贺菌对四环素、红霉素等抗生素耐药性发展中,emrE基因的进化突变没有被筛选,表明有其他能力更强的耐药基因在突变进化中起作用。