鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,5,12:i:-双重RT-RPA快速检测方法的建立

摘要

为了保障食品公共卫生安全,基于实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA),针对鼠伤寒沙门菌、沙门菌血清型4,[5],12:i:-共同携带的STM4495基因以及鼠伤寒沙门菌携带的flj B1,2基因,设计2条探针和一系列候选引物,并进行引物筛选、特异性试验、敏感性试验、各种方法比较检测和人工污染试验,建立一种快速检测鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-的双重RT-RPA方法。结果显示,该方法在39℃条件下20 min内完成检测,鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-的检测下限分别为25.6和251CFU/0.1 m L,不能检出其他肠道致病菌,针对猪产业链及临床样品来源的99株沙门菌与PCR、RT-PCR方法的检测结果一致,针对人工污染样品的检测结果与传统培养法一致。本研究成功建立了一种快速检测鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-的双重RT-RPA方法,具有特异性高、敏感性强的特点,快速简便,20min获取检测结果,在新鲜猪肉、临床病猪肝样品中得到初步应用。