细胞内生成的抗整合酶单链抗体阻断HIV-1复制的实验研究(英文)

摘要

目的通过细胞内表达抗HIV 1整合酶单链抗体(IN sFv)基因 ,阻断病毒基因组与宿主细胞基因组的整合 ,进而抑制病毒复制 ,探讨该基因载体在HIV 1感染基因治疗中应用的意义。方法用带有IN sFv基因的逆转录病毒表达载体 pSLXCMV/IN sFv转染PA317包装细胞 ,并用包装后含有目的基因的逆转录病毒转导SupT1细胞及外周血单个核细胞(PBMC)。以HIV 1NL4 3病毒株感染表达IN sFv的SupT1及PBMC ,用ELISA方法测定病毒感染细胞后不同时间培养上清中HIV 1P24蛋白的含量 ,以监测病毒复制的水平 ;用半定量巢式PCR扩增病毒感染后不同时间点细胞内HIV 1整合前体中的环状病毒DNA ,以明确病毒进入细胞后的整合状态。结果IN sFv在SupT1及PBMC两种细胞中 ,均可明显地抑制病毒的复制。环状病毒DNA在表达IN sFv的SupT1细胞中早于对照细胞8～10h出现。结论细胞内表达的抗HIV 1整合酶单链抗体 ,可显著抑制病毒的整合 ,从而阻断细胞内病毒的复制。该结果为开拓HIV 1基因治疗的新领域奠定了基础。