嘌呤霉素介导的人真皮微血管内皮细胞的分离纯化培养与鉴定

摘要

目的获取纯度较高的人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)。方法取手术切除的多余包皮剪碎,通过两次酶消化接种于35 mm 6孔板中,加入含0.5μg/mL嘌呤霉素的内皮细胞培养基,3 d后更换新鲜培养基;采用倒置单光子共聚焦显微镜观察内皮细胞形态;流式细胞术检测HDMEC细胞表面标志CD31的表达情况。结果培养72 h后可见内皮细胞长出,细胞呈圆形,生长至第5天左右,以梭形细胞为主,第6~10天迅速增殖,形成比较紧密的融合细胞,细胞集落中心为圆形细胞,周围为梭形,呈放射状,第10天可达80%融合,细胞呈典型铺路石样,可见“漩涡状”特征。流式细胞术检测显示HDMEC的CD31表达阳性,CD44表达阴性,内皮细胞纯度达98%以上。结论该方法能够成功获得高纯度的人真皮微血管内皮细胞HDMEC,对皮肤疾病致病机制以及HDMEC的生物学特性和功能的深入研究具有重要意义。