鸡胚不同发育时期原始生殖细胞的分离方法

摘要

采用Ficoll密度梯度离心法和EDTA-胰酶酶解法两种方法,分别提取第14期(孵化53 h)血液、第19期(孵化72 h)和第28期(孵化132 h)生殖腺中的PGCs,以比较两种分离方法对3个发育时期的鸡胚原始生殖细胞在相同体外培养条件下存活时间的差异.结果发现,两种分离方法均能分离到一定数量的原始生殖细胞,但是酶解法分离到的原始生殖细胞的相对数量较Ficoll密度梯度离心法的多,存活时间较长,是一种适宜的分离方法;对鸡胚发育第14、19、28期3个时期提取的原始生殖细胞进行体外培养,存活时间分别为:72 h、88 h和80 h,三者之间差异显著.结果表明:在鸡胚孵化的第19期,因原始生殖细胞大量聚集在肢体后端的生殖嵴原基处,因而较容易收集,体外培养较为适宜,具有较强的可操作性[动物学报49(6):835～842,2003].