猪流行性腹泻病毒S基因片段的克隆及原核表达

摘要

为研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus PEDV)S基因片段的原核表达产物是否具有抗原性,分析S基因抗原位点后,用PCR技术扩增S蛋白主要抗原区的核酸序列,经克隆后将目的片段连接到原核表达载体pET-28a(+)中,成功构建了重组质粒pET-28a-PEDV-Sp,其重组菌于37℃、0.5 mmol/L IPTG诱导表达4h后进行SDSPAGE分析,在分子质量约为29 kDa处出现一新蛋白带,与预期相符.质谱鉴定表明,已成功表达了目的蛋白.纯化后的重组蛋白免疫兔制备多克隆抗体,抗体效价检测结果显示该蛋白具有良好的抗原性.该研究为猪流行性腹泻基因工程疫苗的研制奠定基础.