南药益智SRAP-PCR体系优化及引物筛选

摘要

为了建立适用于南药益智的SRAP-PCR体系,并筛选特异性引物用于研究不同地理居群的南药益智的遗传多样性,采集了海南不同地理居群的益智资源,利用植物基因组DNA提取试剂盒提取益智基因组DNA,并检测其纯度和浓度.采用正交试验对SRAP-PCR体系进行优化,最终建立了最优反应体系(总体积为25μL):Taq酶0.5 U,dNTPs 4mmol/L,Mg2+2 mmol/L,引物各2μmol/L,DNA模板10 ng,10xPCR buffer 2.5 μL.再利用最优反应体系对144对引物进行筛选,共获得7对特异性引物,其扩增片段的大小均在100～2 000 bp以内且分布较均匀,多态性条带比率皆达85％以上.该研究结果为南药益智遗传多样性的研究奠定了基础.