中国人基因组YAC文库的构建及首批克隆鉴定

摘要

本文采用ＰＪＳ９７／ＰＪＳ９８及ＴＰＨ２７４载主宿系统构建中国汉族男性基因组ＹＡＣ文库，在初探基础上不断改进方法，通过控制脉冲条件的原位筛选去除小片段ＤＮＡ分子，用多胺溶液防止６８℃对大片段ＤＮＡ分子的破坏作用，并采用Ａｇａｒａｓｅ消解低熔点胶。转化获克隆１００００余个，采用甘油一步到位法保存８０００余个，对其中一批克隆进行鉴定，转化子阳性率为９５％，其中７５％的片段介于１００～２００ｋｂ间，１０