人趋化因子巨噬细胞炎性蛋白3α的克隆与原核表达

摘要

目的克隆人趋化因子MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.方法从人扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3 alpha成熟蛋白基因,并在5'和3'端分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过与之对应的存在于pET32a(+)质粒上的酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli BL21trxB(DE3),筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变MIP-3 alpha序列前端多余碱基,获得MIP-3 alpha天然蛋白表达载体pET32a(+)/MIP-3 alpha,SDS-PAGE分析其表达,Westem Blot验证融合蛋白.大量表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.结果成功克隆了MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化得到MIP-3alpha融合蛋白.结论在大肠杆菌中成功构建的MIP-3 alpha硫氧还蛋白融合表达载体,以可溶性蛋白的方式表达MIP-3 alpha硫氧还蛋白.