重组腺病毒AD-PTEN转染肾脏成纤维细胞对其细胞周期的影响

摘要

目的 将携带有PTEN基因的重组腺病毒转染大鼠肾脏成纤维细胞,观察其过度表达PTEN对细胞周期的影响.方法 以免疫组化的方法确定PTEN在成纤维细胞中的亚细胞定位,以Ad-PTEN转染成纤维细胞,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况及亚细胞定位,将转染的成纤维细胞及正常对数生长期成纤维细胞消化,流式细胞仪分别检测细胞周期.结果 免疫组化结果显示成纤维细胞的胞浆和胞核中均有PTEN的表达,在胞核中表达水平更高,荧光倒置显微镜下观察Ad-PTEN转染成纤维细胞后外源性PTEN其标志物绿色荧光蛋白(GFP)在胞浆和胞核中均表达,其中胞核表达水平更高,流式细胞仪检测在成纤维细胞中病毒转染组G1/S均明显高于对照组,提示Ad-PTEN转染组细胞存在明显的G1期细胞阻滞.结论 PTEN过度表达将引起肾脏成纤维细胞周期G1期阻滞,这一过程与PTEN在细胞核定位有关.