鲍曼不动杆菌外膜囊泡的提取、纯化及活性检测

摘要

目的 提取并纯化鲍曼不动杆菌(AB)标准株ATCC17978的外膜囊泡(omv),观察其形态、结构并检测其活性.方法 常规培养鲍曼标准株,Optiprep密度梯度超速离心提取并纯化其omv,经负染电镜检测omv形态;BCA法检测omv总蛋白浓度,SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量大小;用纯化的omv和蛋白酶K处理后的omv分别刺激人肺癌上皮细胞A549,同时用设不加omv的A549细胞做对照,酶链免疫吸附(ELISA)法检测炎性因子白细胞介素(IL)-8表达水平.结果 鲍曼不动杆菌分泌的omv为10～200 nm的球状囊泡结构;其合有的总蛋白浓度为43.2 mg/mL;ELISA结果提示,鲍曼不动杆菌分泌的omv可刺激A549细胞产生炎性因子IL-8,且产生水平与omv剂量呈正比.结论 纯化的鲍曼不动杆菌的omv为10～200 nm的双层囊泡结构,内含多种毒力蛋白,能刺激人肺癌上皮细胞A549产生IL-8.