IL-35表达对小鼠脾脏CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞亚群分化的影响

摘要

目的构建小鼠白细胞介素(IL)-35基因表达质粒,探讨IL-35表达对小鼠脾脏中CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞亚群分化的影响。方法采用PCR法扩增获得小鼠IL-35基因全长片段,将该片段连入鼠干细胞病毒载体(pMSCV-GFP)多克隆位点区,获得携带IL-35基因的质粒载体pMSCV-IL-35-GFP。将9只雄性C57BL/6J小鼠分为3组:PBS组、pMSCV组和pMSCV-IL-35组,分别向3组小鼠尾静脉注射PBS、pMSCV-GFP空载质粒和pMSCV-IL-35-GFP质粒。72 h后分离小鼠脾脏,采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测IL-35亚基EB病毒诱导基因3(Ebi3)和IL-12a mRNA相对表达水平;采用流式细胞术检测CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞亚群百分比,并进一步检测CD8^(+)T淋巴细胞免疫功能分子颗粒酶B(Gzmb)和调节性T淋巴细胞(Tregs)细胞特异转录因子叉头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA相对表达水平。结果RT-qPCR结果显示,与PBS组或pMSCV组比较,pMSCV-IL-35组小鼠脾脏Ebi3、IL-12a mRNA相对表达水平均明显升高(P<0.001);流式细胞检测结果显示,与PBS组或pMSCV组比较,pMSCV-IL-35组小鼠脾脏CD8^(+)T淋巴细胞百分比明显降低(P<0.001),而CD4^(+)CD25^(+)Tregs百分比明显升高(P<0.001),并且Gzmb mRNA相对表达水平明显降低(P<0.01),Foxp3 mRNA相对表达水平明显升高(P<0.01)。结论IL-35可以抑制效应性T淋巴细胞的活性,促进Tregs亚群分化发挥免疫调节作用,这将为IL-35基因应用于体内免疫治疗提供理论依据。