脑缺血小鼠大脑皮层CD4、CD8免疫反应观察及脾T淋巴细胞亚群变化

摘要

背景和目的：免疫机制与中枢神经系统损伤、肿瘤、缺血以及退变性疾病密切相关。急性缺血性脑卒中是中枢神经系统的急性损伤性病变，有研究表明，免疫机制参与了缺血性脑损伤的发生发展过程。脑缺血时，激活的小胶质细胞，浸润的外周血多形核白细胞、中性粒细胞和单核细胞等炎性细胞介入脑缺血性损伤的病理过程外，机体的免疫细胞水平也有变化。当T淋巴细胞亚群的数量和功能异常时，机体可产生免疫紊乱而导致机体发病。T细胞亚群与脑缺血的联系近年来倍受重视。本实验研究的主要目的在于观察脑缺血后脑组织淋巴细胞浸润情况及脾脏T细胞亚群的变化，探讨淋巴细胞及其亚群在缺血性脑损伤中的作用。 方法：研究对象为健康成年雄性Balb/c小鼠，光化学法建立小鼠局灶性脑缺血模型，分为对照组、单纯光敏剂组和脑缺血组，各组又分为脑缺血后6h、1d、3d和7d四个亚组。在处死前半小时，无菌条件下取出脾脏，制备单个核细胞悬液，用于流式细胞仪检测脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞百分率及CD4+/CD8+的比值。在相应时间点处死动物，通过Nissl染色观察受损脑区皮层的形态学变化，免疫组织化学染色检测皮层CD4和CD8阳性细胞的反应。 结果：Nissl染色显示：对照组和单纯光敏剂组皮层无损伤，细胞分布和形态均正常，两组之间无差异。与对照组相比，缺血组6h就出现损伤区，1d和3d可见梗死区与周围正常脑组织有一明显的分界线，缺血周边皮层神经元数量明显减少。7d可见损伤周围有大量细胞浸润。免疫组织化学染色显示：单纯光敏剂组与对照组无差异。脑缺血组与对照组相比，CD8免疫组织化学染色3d时可见圆形、无明显突起细胞和分支状突起的阳性细胞(P＜0.05)，主要分布于缺血周边区。7d时阳性细胞数量明显增加(P＜0.001)。CD4免疫组织化学染色在对照组、单纯光敏剂组和脑缺血组均为阴性。流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞亚群，与对照组相比，脑缺血组CD4+T淋巴细胞百分率在6h、1d和3d时明显降低(P＜0.001)，CD8+T淋巴细胞百分率在6h、1d和3d时降低(P＜0.05)。CD4+/CD8+的比值在6h、3d和7d降低(P＜0.05)，在1d时显著降低(P＜0.001)。 结论：1.在脑缺血超早期(6h内)，缺血中心区神经细胞数量明显减少，提示缺血一旦发生，即很快对脑细胞产生影响。因此，缺血性脑梗塞一旦发生应及早救治，才能更有效地挽救半暗带神经元。 2.脑缺血周边区CD8抗原的高表达，启动局灶的免疫反应。提示脑缺血的组织损伤过程有免疫反应参与。CD4抗原在本实验未观察到阳性表达，在脑缺血损伤中的作用还需进一步探讨。 3.脑缺血3d内脾脏CD4和CD8阳性T淋巴细胞亚群水平降低，表明脑缺血早期机体免疫功能降低。

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摘要

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实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

致谢

参考文献

综述神经系统疾病与免疫