6-O-脱硫酸化肝素通过Syndecan-1/c-Met/Akt途径延缓博来霉素诱导的肺损伤

摘要

目的探究不同硫酸化方式的肝素类药物对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导肺损伤保护作用的分子机制。方法首先,合成不同硫酸化方式的肝素衍生物——6-脱硫酸肝素(6-DeH)和N-乙酰化肝素(N-AcH);其次,通过乳酸脱氢酶活性测定、MTT实验、Annexin V/PI染色和Hoechst 33258染色等系列实验评价各化合物对BLM诱导支气管上皮细胞(BEARS-2B)损伤的保护作用;接着,通过免疫荧光染色、蛋白免疫印迹等方法考察了6-DeH对Syndecan-1脱落的抑制作用,以及对下游c-Met/Akt信号通路的影响;最后,构建了BLM诱导的肺损伤小鼠模型,通过HE染色、Syndecan-1免疫染色、体质量、生存率等参数测定,进一步验证6-DeH对BLM诱导肺损伤的作用。结果通过构建BLM诱导BEARS-2B细胞损伤模型,发现6-DeH可与细胞表面硫酸乙酰肝素竞争性结合BLM,减少BLM对细胞的损伤,减少细胞表面Syndecan-1脱落,并激活c-Met/Akt信号通路,从而提高细胞存活率;通过BLM诱导的肺损伤小鼠模型,进一步验证了6-DeH能够在肺损伤的早期减少Syndecan-1的脱落,并延缓肺损伤、纤维化进程。结论6-DeH具有保护BLM诱导肺损伤的作用,其机制与抑制Syndecan-1的脱落和激活c-Met/Akt信号通路有关。