新型抗AD活性化合物DL0410降低Aβ毒性作用机制研究

摘要

目的研究发现Aβ聚集是神经毒性的重要因素,抑制Aβ聚集和解聚Aβ的药物是防治AD的重要途径.本实验室筛选了具有乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶抑制作用化合物DL0410.前期研究发现,DL0410还可以剂量依赖性地清除Aβ,但其具体机制仍不完全清楚.因此,本研究旨在探讨DL0410的抑制Aβ聚集并发挥神经保护作用的机制.方法利用硫磺素-T（Th-T）结合实验进行DL0410抑制Aβ1-42聚集的评价;利用30、60μmol·L^-1Aβ1-42损伤PC12细胞建立线粒体损伤的AD细胞模型,采用CCK-8染色评价细胞活力,通过JC-1检测线粒体膜电位变化;采用Aβ1-42侧脑室注射ICR小鼠模型,考察DL0410对AD模型动物学习记忆功能的作用.结果DL0410在1～10μmol·L^-1浓度范围内,DL0410对Aβ1-42聚集有浓度依赖性抑制作用,在10μmol·L-1浓度下抑制率26%（P〈0.01）;可抑制Aβ引起的神经细胞凋亡,与模型组比较存活率提高14%（P〈0.01）;提高Aβ引起的线粒体膜电位下降,可使膜电位升高12%（P〈0.05）;分子对接结果提示,DL0410抑制Aβ聚集主要是依赖疏水以及π阳离子相互作用.Aβ1-42侧脑室注射ICR小鼠在水迷宫实验中,小鼠定向航行训练d3,与模型组比较,给予化合物DL0410（10,30mg·kg^-1）后,小鼠寻找站台的潜伏期有明显的缩短（P〈0.05）;被动回避能力试验结果显示,与模型组比较给予DL0410（3、10、30mg·kg^-1）对其跳台潜伏期明显提高（P〈0.05）;DL0410（30mg·kg^-1）下调Aβ引起的caspase-3蛋白表达升高,使caspase-3蛋白下调30%（P〈0.05）.结论DL0410可抑制Aβ聚集,下调介导线粒体凋亡关键蛋白caspase-3,通过线粒体膜透过性转运孔（PTP）改善线粒体功能,提高AD模型动物学习记忆功能,发挥神经保护作用.