野百合碱对人肝窦内皮细胞的毒性机制研究

摘要

目的 利用人肝窦内皮细胞(human hepatic sinusoidal endothelial cell,HHSEC)探讨野百合碱(monocrotaline,MCT)的体外毒性及其毒性作用机制.方法 CCK-8检测MCT对细胞存活率的影响;通过LC-MS检测毒性代谢物吡咯蛋白加合物(PPA)的水平;用试剂盒检测细胞中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量;通过 Hoechst 染色、荧光底物法和 Western blot来检测细胞凋亡情况;QT-PCR分析细胞中相关基因的mRNA 表达情况.结果 与空白组比较,MCT(5,10 mmol· L-1)能明显降低HHSEC的细胞存活率;在给药后的HHSEC和培养基中均检测到了大量PPA,且其水平呈剂量依赖性增加;并明显降低了HHSEC中GSH含量.MCT能导致细胞核固缩,同时提高caspase-3蛋白酶活性,诱导细胞中凋亡蛋白的表达水平升高.MCT诱导代谢活化关键酶CYP3A4,并使细胞中VEGFA和 MMP9 基因表达上调,NOS3 基因则表达下调.结论 MCT经HHSEC内代谢酶代谢活化,同时消耗细胞内GSH,破坏肝脏抗氧化系统,激活了HHSEC凋亡并影响内皮及血管系统等进一步加剧细胞损伤.